血清中16種全氟及多氟烷基化合物的（de）測（cè）定-超高效方案

簡介

本（běn）方法使用（yòng）創新型分體式HMR淨化管/96孔板結合（hé）96孔正壓（yā）固相萃取裝置（zhì）一步式淨化血清樣品，再通過LC-MS/MS進行檢測，回收率（lǜ）達90%左右。樣品處理過程簡單，結果準確。

方（fāng）法優勢

Ø                      蛋白沉（chén）澱和磷脂去除一步（bù）完成，可有效（xiào）去除血清中蛋白、磷脂類化合物（wù）對實驗結果的影響

Ø                      通過式淨（jìng）化（huà），極大（dà）簡化前處理步驟，約1h即可完成前處理操作

Ø                      上樣量僅（jǐn）需（xū）50μL，大大節省了寶貴的樣品

Ø                      試劑耗材使用量更（gèng）少，更加環保節（jiē）約

Ø                      柱效遠超直通式SPE，回收率穩定，可達90％左右

配套設備及（jí）耗（hào）材

樣品前處理

儀器條件

1）色譜條（tiáo）件

色（sè）譜柱：Leosil C18/PFP核殼（ké）柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）

流動（dòng）相：5mmol/L乙酸銨（ǎn）甲（jiǎ）醇（A），5mmol/L乙酸銨水溶液（B）

流速：0.4mL/min

柱溫：50℃

進樣量：2μL

流動相梯度表

2）質譜條（tiáo）件

AB 6500+質譜檢測器采用多反應檢測模式（Multiple

Reaction Monitoring，MRM），ESI負離子模式。

離子源：電噴霧離（lí）子源；

掃（sǎo）描方式：負（fù）離子掃描；

檢測方式：多反應離子（zǐ）監測（MRM）；

電噴霧電壓：-4500V；

離子（zǐ）源溫度：400℃；

輔助氣1：60psi；

輔助氣2：60psi；

氣簾氣：30psi；

碰撞氣體：Medium

目標PFASs的離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數見下表

方法定量（liàng）限

在以下兩種方法中取大（dà）值作為本項目的方法定量限（Limit of quantification，LOQ）：（1）在實際血清基質中滿足（zú）信噪比（bǐ）大於10的低濃度，信噪比采用RMS（Root Mean Square，RMS）方法；（2）標準曲線工作範圍內滿足實測濃（nóng）度在理論值偏差±20％之（zhī）內的低濃度。由於本研究中樣品未經（jīng）濃縮和稀釋，無稀釋倍數，因此方法定量限即為LOQ，如下表。

16種PFASs的定量限

回收率和（hé）精密度

血清（qīng）中16種全氟（fú）化合物不同水平加標回收率和（hé）精密度（n=6）

實驗注意事項

1、內標體積太小（50、20微升），稍微有損失，就會影響定量（liàng），所以建議先加樣品、再（zài）加內標，後加乙腈；

2、加液體過程中（zhōng），一定注意盡（jìn）量讓移液槍的槍頭接近淨化管中上層篩板加液。需要（yào）正確使用移液槍，特別（bié）是小體（tǐ）積加樣時；

3、建議分兩次加入乙腈。如果隻加一次乙（yǐ）腈，可能洗脫不完全，淨（jìng）化管裏有殘留。壓完一次，加入乙腈（jīng），再正壓；

4、乙腈：血清的比（bǐ）例從3：1開始優（yōu）化（huà）；

5、其他項目根（gēn）據化合物的（de）性質選擇甲醇或乙腈作為提取溶劑（jì）。