EZsep™ C18固相萃取柱用於水產品（pǐn）中氯黴素的檢測

本文參照（zhào）《GB 31658.2-2021 食品安全國家標準 動物性食品中氯黴素殘留（liú）量的測定（dìng） 液（yè）相色譜-串聯質譜法》，利用EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）進行淨化，再用高效液相色譜串聯質譜檢測（cè）進行檢測（cè），建立了一種對水產（chǎn）品中氯黴素的分析方法。

關鍵詞：

水產品（pǐn），氯（lǜ）黴素，固相萃取，

1，  實驗過（guò）程

1.1     儀器（qì）與試劑（jì）   

SPE1000 全自動固相萃（cuì）取係統，北京.17c嫩嫩草色视频蜜 %A儀器股份有限公司；

M64高通量平行濃縮儀（yí），北京.17c嫩嫩草色视频蜜 %A（kē）儀（yí）器股（gǔ）份有（yǒu）限公司；

4500質譜係統，SCIEX公司；

EZsepTMC18固相萃取（qǔ）柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304），北京萊伯帕茲檢（jiǎn）測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安（ān）亭（tíng）科學儀器廠  ；  

甲醇（chún）（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有（yǒu）限公（gōng）司；

乙腈（色譜純（chún）），購自（zì）賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

正（zhèng）己（jǐ）烷（色譜（pǔ）純），購自賽默（mò）飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸（suān）乙酯（色（sè）譜純），購自賽（sài）默飛世爾科技（中國）有限公司；

氯化鈉（分析純），購自國藥集團化學試劑有限公司（sī）。

1.2                      工作液配製

氯黴素標準儲備（bèi）液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購自壇墨質檢標準物質中（zhōng）心 。

氯黴素-D5標準儲備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購自壇（tán）墨質檢標準物質（zhì）中（zhōng）心 。

標準中間液（yè）:移取氯黴素儲備液和氯（lǜ）黴素-D5標準儲備液各0.1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中（zhōng），配（pèi）製成濃度為1.0μg/mL的氯黴素標準中間液及氯（lǜ）黴素-D5同位素（sù）標準中間液。

標準使用液:移取氯黴素中間液和氯黴素-D5標準（zhǔn）中間液各（gè）1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配（pèi）製成（chéng）濃度為0.1μg/mL的氯黴（méi）素標準使用液及氯（lǜ）黴素-D5同位素標準使用液（yè）。

分別移取（qǔ）0.1μg/mL的氯黴（méi）素標準使用液（yè）0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分別置於10mL容量瓶中並加入氯黴素-D5同位素標準使用液0.2 mL以（yǐ）純（chún）水定容至（zhì）刻度（dù），標準濃度為（wéi）0 μg/L、0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、2μg/L、5μg/L， 氯黴素-D5濃度固定為（wéi）2μg/L。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品製備

 取魚（yú）肉5g，加氯黴素-D5同位素標準使用液0.2 mL、乙腈5mL、4%氯化鈉（nà）溶液（yè）5mL，渦旋振蕩2min，4000r/min離心10min，取上清液，殘（cán）渣重複（fù）提取1次（cì），合並上清液。加正己烷5mL,渦旋振蕩1min，2000r/min離心（xīn）10min，棄去上層液，正己烷重複處（chù）理1次。加水飽和的乙酸乙酯（zhǐ）溶（róng）液5mL,渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，上層液轉移到20mL上樣瓶中，重複提取1次，合並提取液，氮氣吹幹，加（jiā）3mL5%乙腈水（shuǐ）溶液溶解，混勻，備用待淨化。

1.3.2 固相萃取淨化 

EZsepTMC18固相萃（cuì）取柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）用10mL甲醇、10mL水依次進（jìn）行活化，取1.3.1待淨化液上樣，上樣結束（shù）後用3mL、3mL水淋洗萃取柱，再用4mL 50%甲醇水溶液洗脫萃（cuì）取柱（zhù），收集洗脫液，加水飽和乙酸乙酯4mL，渦（wō）旋振蕩1min，2000r/min離心5min，取上層液，重複處理1次（cì），合並上層溶液，氮氣吹至近幹幹。加1mL 50%甲醇（chún）水溶液溶解，混勻過微孔濾膜後（hòu）供LC-MS/MS測定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器（qì）條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測方式：多反應監測（MRM）；

流動相：A:水-B: 甲（jiǎ）醇（chún）（50:50）；

流（liú）速：0.2mL/min；

進樣量：1μL；

2，                      實驗結果

圖1 標液色譜圖

圖2氯黴素標準曲線圖

3，                      結（jié）論 

本次實驗展（zhǎn）示了使用EZsepTMC18固（gù）相（xiàng）萃取（qǔ）柱（1000 mg/6mL，貨號：PZ10304）對水產品中氯黴素進行淨化，通過高效液相色譜串聯質譜進行測定，其（qí）加標回收率在84.7%~105.2%之間（jiān），RSD在8.1%，能夠滿足標準要求。說明EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號（hào）：PZ10304）能很好的完成方法中的淨化工作，並且結果穩定、可靠。

4，                      參考文獻

1.       《GB 31658.2-2021 食品安全國家標準 動物性食品中（zhōng）氯黴素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》

表 1   加標回收率結果