EZsep™ AFB&G免（miǎn）疫親和柱用於玉米中黃曲黴毒素B族的（de）檢測

前言：

黃曲黴毒素B1（Aflatoxin B1，簡寫為AFB1）是已知（zhī）的化學（xué）物質中（zhōng）致癌性非常強的一種，對人和動物具有（yǒu）強烈的毒性，其（qí）毒性作用主要是對肝髒（zāng）的損害。

黃曲黴毒素B1存在於土壤，動植物各種堅果（guǒ），特別是花生和核桃中。在大豆、稻穀、玉米（mǐ）、通（tōng）心粉、調味品、牛奶、奶製（zhì）品、食用油等製品中也經常發現黃曲黴毒素（sù）。一般以熱帶和（hé）亞熱帶等南方高溫、高（gāo）濕地區受汙染為嚴重，食品中黃曲黴毒素的檢出率比較高。黃曲黴毒素耐熱，280℃才可裂解，故一般烹調加工溫度下難以被破壞。國（guó）家質檢總局規定黃曲黴（méi）毒素B1是大部分食品的必檢項目之一。

本文參考《GB 5009.22-2016 食品安全國（guó）家標準 食品中黃曲（qǔ）黴毒素B族和G族的測定（dìng） 第三（sān）法為高效液相色譜-柱後衍生法》，利用EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，貨號：PZ24102）淨化樣品，再通過（guò）高（gāo）效液相色譜儀進行檢（jiǎn）測，建立了一種玉米中黃曲黴毒素B族的分析方法。

關鍵（jiàn）詞：

黃曲（qǔ）黴毒素B族，免疫親和，高效液（yè）相色譜

1 實驗過程

1.1 儀器與試劑

SPE1000全自動固相萃取係統，北京萊（lái）伯泰科儀器股份有限公司；

LC600二元高壓梯度高效液相色譜（北京（jīng）萊（lái）伯泰科儀器股份有（yǒu）限公司）配光化學衍生器；

E.T.氮（dàn）吹濃縮儀（yí）（貨號：C020017），北京萊伯帕茲檢測科技有限（xiàn）公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠；

EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，貨號：PZ24102），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

甲醇（色譜（pǔ）純），購自賽默飛世爾科技（中（zhōng）國）有限公司；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科（kē）技（中國）有限（xiàn）公司；

超純水；

0.1%吐（tǔ）溫-水：1mL的吐溫-20，加水（shuǐ）定容至1L。

1.2 工作液配製

乙腈中4種黃曲黴毒素混標儲備液：1.0μg/mL，壇墨質檢 。

黃曲黴毒素混標中間液：移取黃曲黴毒素混標（biāo）儲備液1mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配製成濃（nóng）度為100ng/mL的中（zhōng）間液。

黃曲黴毒素混標工作液：移（yí）取黃曲（qǔ）黴毒素混標中（zhōng）間（jiān）液1mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配製成濃度為（wéi）10ng/mL的（de）工（gōng）作液。

分（fèn）別移取100ng/mL的黃曲黴毒素混標中間液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中，用初始流動相定容至刻度，得到濃度依次為0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的標準工作（zuò）溶液。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品製備

 稱取5g玉米試樣（yàng）(精確至0.01g)於50mL離心管中，加（jiā）入（rù）20.0mL甲醇-水溶液(70+30)，渦旋混勻，用均質器10000r/min上下（xià）震蕩均質（zhì）3 min，在6000r/min下離心20min。準確移取4mL上清液，加入46mL0.1%吐溫-水，混勻，待淨化。

1.3.2 淨化與（yǔ）濃縮

將低溫保存的EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，北京萊伯（bó）帕茲檢測科技有限公司（sī），貨號（hào）：PZ24102）恢複至室溫，待免疫親（qīn）和（hé）柱內原有液體流盡後，移取上述待淨化液上樣，上樣結束後用20mL水分2次淋洗萃取（qǔ）柱（zhù），之後在真空狀（zhuàng）態下幹燥1min，後用2mL甲醇洗脫。洗脫（tuō）液在40℃下氮（dàn）吹濃縮（suō）至近幹，再用流動相定容（róng）至1 mL，渦旋混勻，0.22μm濾膜過濾，待檢測。

1.3.3 高（gāo）效液相色譜檢測條件

色譜（pǔ）柱：Promosil C18（5μm，4.6*250mm）

波長：激發波長360nm，發射波長440nm

流速：1.0mL/min

柱（zhù）溫：40℃

進樣量（liàng）：20μL

流動相：超純水：甲醇+乙腈（50+50）=68:32

2 實驗結果

圖1 標準樣品色譜圖

圖（tú）2 加標樣品（pǐn）色譜圖

圖3空白樣品色譜圖

3 結論 

本實驗使用EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，北京（jīng）萊伯帕茲檢測科技有限公司，貨號：PZ24102）對玉米中（zhōng）黃曲黴毒素B族（zú）進行淨化後通過高效（xiào）液相（xiàng）色譜儀進行（háng）檢測，該方法的加標回收率在81.1%~93.2%之間，RSD在2.2%~2.7%之間。回收（shōu）率和穩定性滿足標準要求，說明EZsep^TM AFB&G免疫親和柱能很好的完成方法中的淨化工作，並且結果穩定、可靠。

4 參考文獻

[1] GB 5009.22-2016 食品安全（quán）國家標準（zhǔn） 食品中黃曲黴（méi）毒（dú）素B族和G族的測定 第三法高效液相（xiàng）色譜-柱後衍生法

表1  加標回收率