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1、前（qián）言

咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合（hé）物，是一種中樞神經興奮劑，能（néng）夠（gòu）暫時的驅走睡意並恢複精力，臨床上用於治療神經衰弱和昏迷複蘇。有咖啡因成分（fèn）的咖啡、茶、軟飲料及（jí）能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是普遍被使（shǐ）用的精神（shén）藥品。適度地使用咖啡因具有舒張血（xuè）管、促進血液循環、預防高血壓、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、減肥等（děng）藥理和生理作用，但是，大劑量或長期使用也會（huì）對人體造成損害，能夠導（dǎo）致“咖啡因中毒”，如神經過敏，易怒，焦慮（lǜ），震顫，肌肉抽搐（反射亢進），失眠（mián）和心悸。中國把咖啡因列為“精神藥品”管製，屬於一種（zhǒng）毒品。目前有（yǒu）關（guān）咖啡因檢測分析的研究報道不多，為此本文通過使用SPE 1000全自動固相萃取係統對人體血液中咖啡因進（jìn）行回收率測定分析（xī），探索血液咖啡因樣本檢測（cè）的方（fāng）法。

2、實驗過程2.1儀器與試劑

SPE 1000全自（zì）動固相萃取係統，萊伯（bó）泰科

MV5多通道平行濃縮（suō）係統，萊伯泰（tài）科

LC600 二元高壓梯（tī）度高（gāo）效液相色譜（pǔ），.17c嫩嫩草色视频蜜 %A

EZsep^TMHLB固相萃取柱（zhù），（60mg/3mL北京（jīng）萊伯帕（pà）茲（zī）檢測科技有限公司貨號：PZ12602）

血液替代品：牛（niú）血清，市售

2.2工作液配製

咖啡因（yīn）標準儲備液：100μg/mL

咖啡因標準（zhǔn）工（gōng）作液：取1mL標準儲備液放入（rù）10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL標（biāo）準工作液

2.3實驗部（bù）分

2.3.1樣品製備

取血液樣（yàng）本1mL加入（rù）磷酸鹽緩衝液1mL平衡，加入50μL標（biāo）準工作液，混合均勻，加標濃度為500ng/mL，待固相萃取。

2.3.2淨化與濃（nóng）縮

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公（gōng）司貨號：PZ12702）用5mL甲（jiǎ）醇乙酸乙酯（1：1）、5mL水和5mL磷酸（suān）鹽緩衝（chōng）液進行活化，取全部樣液上樣（yàng），上樣（yàng）結束（shù）後用2mL磷（lín）酸鹽緩衝液和2mL水淋洗萃取柱（zhù），在真空狀態下幹（gàn）燥0.5min，後用5mL 磷酸鹽緩衝液近幹（gàn）後，用流動相定容至1mL 。渦旋混勻，0.22μm濾膜過濾，待檢（jiǎn）測。

2.3.3 高效液相色譜檢測條件

色譜柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm

波長：272nm

流（liú）速：1mL/min

柱溫：40℃

進（jìn）樣（yàng）量：20μL

流動相：甲醇-水= 24：76

3、實驗結果

圖1標準樣（yàng）品色譜圖

圖2加標樣品色譜圖

圖3空（kōng）白樣品色譜圖表1 加（jiā）標回收率結果

4、結論（lùn）

本次實驗展示（shì）了（le）一（yī）種使用EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢（jiǎn）測科技有限公（gōng）司貨號：PZ12702）對血液（yè）中咖啡因進行萃取淨化，其加標回收率95.8%~99.2%，重複性RSD為1.6%。說明（míng）EZsep^TMHLB固相萃取柱適用於血液（yè）中咖啡因的檢測，並且在回收率和平行性上表現優異。

耗材專區血液中咖啡因的測（cè）定（dìng）

2.2工作液配製

2.3.1樣品製備

2.3.2淨化與濃（nóng）縮

2.3.3 高效液相色譜檢測條件