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前言

在蛋白（bái）質組學（xué）研（yán）究中，C18 96孔板被廣泛（fàn）應用於肽段脫鹽（yán）和純（chún）化步驟，尤其適用於高通量樣本處理（lǐ），為下（xià）遊質譜分（fèn）析提供高質量樣本。

Empore™ C18 96孔板簡介

耗材專區 | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽（yán）過程中的應用

Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高（gāo）通量固相萃取而設（shè）計，板的每個孔內都有一個有（yǒu）效直（zhí）徑為5.5mm的C18固相萃取膜（mó），固相萃取膜和其上（shàng）方的預過濾（lǜ）層被壓環（huán）固定到每個孔的底部，預過濾層可有（yǒu）效提高（gāo）大多數生（shēng）物樣品前處理流速。有效直徑是指可用於樣品處理的萃（cuì）取膜實際使用直徑。標（biāo）準板的單（dān）孔儲液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試（shì）劑的體積超過（guò）板（bǎn）的單孔儲液體（tǐ）積，可分（fèn）批次加液。

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Empore™ C18 96孔板技術優勢（shì）

高通量、低樣本損失、兼容自（zì）動化設備。
致密且穩定的膜結構消（xiāo）除了散裝填料孔（kǒng）板中存在（zài）的溝流和孔洞的問題（tí），數據重現性更高。
薄薄的膜結構更易被洗（xǐ）脫，回（huí）收率更高。

C18 96孔板脫鹽原理

C18鍵合相（xiàng）（十八烷基矽烷）通（tōng）過疏水相（xiàng）互作用吸附肽段，去（qù）除鹽分、去垢（gòu）劑等雜質，隨（suí）後用有機溶劑洗脫肽段，實現脫鹽和濃縮（suō）。

實驗前準備

1、材料與試（shì）劑

CDS Empore™ C18 96孔板（貨號：70-2007-3982-2EA，規格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）
緩衝液：

活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（suān）（TFA）水溶液;

洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;

洗脫液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲（jiǎ）酸（suān））。

真空抽濾裝置或離心機（適配96孔板）
肽段樣本（酶（méi）解後的複雜混（hún）合物（wù））

2、板預處理

活化：每孔加入200μL 100% ACN，靜（jìng）置1分鍾（zhōng），抽幹。
平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重複2次，確保（bǎo）填料親水化。

脫（tuō）鹽步驟

1、上樣

將肽段樣本（溶於0.1% TFA）加入孔中。
注意：樣本pH需≤3（TFA調節），以增（zēng）強肽段與C18的結合。

2、洗滌

每孔加入（rù）200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重複2-3次，去除（chú）鹽分和極性雜質。
真空抽幹或離心去除液體。

3、洗脫

加入50-100μL洗（xǐ）脫液（yè）（如0.1% TFA/50% ACN），靜置1分鍾，收集洗脫液至收集板。
可重複洗脫1次以提高回收率。

4、幹燥（zào）

合並洗脫（tuō）液，真空離（lí）心幹燥（如SpeedVac）後溶於質譜上樣緩衝液（如0.1%甲酸）。

關鍵（jiàn）參數優化

1、流速控製

手動操作時避免流（liú）速過快（依賴（lài）重力或離心）；自動化平台可調至1mL/ min。

2、有機相比例

洗脫ACN濃度需優化（通常50-80%），過高可能導致疏水性雜（zá）質共洗（xǐ）脫。

3、樣本載量

避免超載（肽段載量：100μg左右/孔），否（fǒu）則會導致回收率低。

應用場（chǎng）景

1、質譜前（qián）處理

去除（chú）LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS、尿素、磷酸鹽）。

2、分級洗脫

與（yǔ）高pH反相分餾聯用，提（tí）高肽段覆蓋度。

3、自動化整合

適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實現高通量。

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