EmporeTM膜式（shì）固相（xiàng）萃取柱萃取尿液中四氫（qīng）大麻酚代謝物並以GC-MS定量

1， 實（shí）驗過程

1.1 儀器與試劑 

所有（yǒu）試劑（jì）均為分析純或更高（gāo）。

THCCOOH（100.0±0.6 μg/mL）和 MSTFA + 1% TMCS矽烷化試劑，均購自西格瑪奧德裏奇（上海（hǎi））貿易有限（xiàn）公司；

人工尿液（PH：5.7-500mL），購自福州（zhōu）飛淨生物科技有限公司；

乙（yǐ）酸乙酯（色譜純），購（gòu）自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾（ěr）科技（jì）（中國）有限公司；

正己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國（guó））有限公司；

Empore^TM 膜式固相（xiàng）萃取柱：4215SD-C18，購自美國CDS公司（sī）；

氣質聯用儀：7890B-5977B安捷（jié）倫氣質聯用儀，Agilent公司。 

1.2 工作液配（pèi）製 

THCCOOH標準使用溶液：0.1 μg/mL，溶劑體係為甲醇；

1.3 實驗部（bù）分

1.3.1 樣品製備

取12個（gè）15mL離心管，分別裝入3mL尿液樣品，再加入不同體積的THCCOOH標準使用液（加標量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng），每個標點進行平行（háng）兩次製備。然後（hòu）加入300μL氫氧化（huà）鉀溶（róng）液（10mol/L）,在60℃水浴環境下（xià）水解15min取出後冷卻至（zhì）室溫，再以冰醋酸調節pH值到4.0~4.5。

Empore^TM固相萃取柱（C18, 7mm/3mL）預（yù）先用150μL甲醇（chún）進行活化，之後進行上樣（在重力作用下（xià）使樣品自然流下），上樣結束後用750μL甲醇-水溶液（50：50）淋洗萃取柱，在690mmHg真空狀態下（xià）幹燥5min，後用800μL正（zhèng）己烷-乙酸乙酯溶液（75：25）進行洗脫。

1.3.2 淨化與濃縮

洗脫液經40℃氮吹至幹，然後加入（rù）100μL衍生試劑（MSTFA+1%TMCS），在60℃水浴條件下衍生20min，轉移（yí）至樣品瓶待 GC-MS分析。

1.3.3 標準曲線配製

取6個20mL樣品瓶，分（fèn）別加入不同體積THCCOOH標準使用溶（róng）液（yè），加入THCCOOH的質量分別（bié）為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，參（cān）照（zhào）與加（jiā）標樣品製備同等濃縮、衍生條（tiáo）件進行前（qián）處理，待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

進樣口溫度：290℃；進樣（yàng）模式：不分流進樣；流速：1.0mL/min；

柱（zhù）溫：100℃保持1min，然後以30℃/min的速度升至300℃，保持5min。

表1 THCCOOH定量、定性離子（zǐ）

2, 實驗結果（外標法） 

實驗發（fā）現：標準（zhǔn）曲（qǔ）線第一個點（3ng）信噪比（bǐ）較（jiào）低，難以準確積分。標準曲線第（dì）五個點（diǎn）（150ng）結果明顯偏低，為實驗操作衍生化失（shī）誤引（yǐn）進（jìn）誤差。 

 圖1標準曲線校準點重疊色譜圖

 

圖2 標（biāo）準曲（qǔ）線

3，結果（guǒ）與討論

本次實驗展示了一種（zhǒng）使用CDS-Empore^TM 固相萃（cuì）取柱（215SD-C18），對尿液中四氫大麻（má）酚代謝物（THCCOOH）進行富集（jí）提取（qǔ）的簡單有效方法。實驗中，尿（niào）液加標樣品經水解、固相萃取淨化、濃縮以及衍生等前處理步驟後，經GC-MS分析得（dé）到不同濃度下四氫大（dà）麻酚代謝物（THCCOOH）的加（jiā）標回收率，回收率範圍在78.7-110.1%，結果較好。標準曲線濃度範圍在（zài）0.15μg/mL~3.0μg/mL時，相關係數R²=0.9998，具有（yǒu）較好線性。實驗（yàn）表明，CDS-Empore^TM 固（gù）相萃取柱（215SD-C18）適用於尿液中四氫大麻酚代謝物（wù）（THCCOOH）的（de）萃（cuì）取淨化。該方（fāng）法具有操作簡便，線性範圍寬，穩（wěn）定性高等優點，並在尿液量少，分析物濃度較低時顯示出優異的回收率。

4，參考（kǎo）文獻

1，Jasbir Singh and Linda Johnson，Solid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MS，Journal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997。

2，R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.

3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-△⁹-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)