Empore™ C18固相萃取膜片應用於自（zì）來水中微囊（náng）藻毒素的檢測

微囊藻毒（dú）素，MC，Empore，47mm固相萃取膜

前言：

微囊藻毒素（Microcystin，MC）是一類具有生物活性的，自然環境中廣泛分（fèn）布的（de）肝毒素。它對人體蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑製作用，與腫瘤促進作用有直接關係。中國生（shēng）活飲用水衛（wèi）生標（biāo）準（GB/T 5749-2006），將飲用水（shuǐ）中微囊藻毒素含量限製為1.0μg/L，該標準的實施對水源水的質量提出（chū）了更高的要求[1]。

實（shí）驗中，采用（yòng）1升水樣通過47mm的Empore™ C18固（gù）相萃取膜片（貨號：98-0604-0217-3）處理，並用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脫。然後通過HPLC對提取物進行定量[2]。

1， 實驗過程

1.1 儀器與試劑 

所有試劑均為分析純或更（gèng）高。

微囊（náng）藻毒素-LR標準物質（農業部（bù）環境保護科研監測所，20μg/mL，溶劑：甲醇）；

Empore^TM 固相（xiàng）萃取膜：C18，47mm，購自美國CDS公司（貨號：98-0604-0217-3）；

甲醇（色譜純， Fisher Chemical）

三氟乙（yǐ）酸（分（fèn）析純，天津市福晨化學（xué）試劑廠）

磷酸二（èr）氫鉀（分析純，北京化學試劑公司）

磷酸（分析純，國藥集團化（huà）學試劑公司）

純淨水，產自Milli-Q® EQ 7000係統，美國密（mì）理博Millipore公司

磷酸二氫鉀溶液（0.05mol/L）：稱取6.8g磷酸二氫鉀，用水溶解，定（dìng）容至1000.0mL

磷酸鹽緩衝液：用20%（體積分數）磷酸溶液將磷酸二氫鉀溶液調至pH到3

0.1%三氟乙酸-甲醇溶（róng）液：用甲醇將0.1mL三（sān）氟乙酸定容至100.0mL

Sepaths UP 柱膜（mó）通用全自動固相萃取係統，北京.17c嫩嫩草色视频蜜 %A儀器股份有限公司；

高效液相色（sè）譜儀：LC600 二元高壓梯（tī）度高效（xiào）液相色譜（pǔ），北京.17c嫩嫩草色视频蜜 %A儀器股份有限公司。

1.2 工（gōng）作液配製（zhì） 

微囊藻（zǎo）毒素（sù）-LR工作液：將20μg/mL微囊藻毒素-LR標準物質（zhì）用甲醇稀釋至（zhì）濃度為2μg/mL；

1.3 實驗

1.3.1 樣品製備

1L 自來水中（zhōng）加（jiā）入100mg硫代*，再加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR標準工作液（yè），樣品的加標（biāo）濃度為（wéi）400ng/L。超（chāo）聲30min，待萃取。使用同一批Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm)對每個樣品進行四次重複（fù）製備。

1.3.2 淨化與濃（nóng）縮

將樣品及Empore^TM 固相萃取膜（C18，47mm）加入Sepaths UP 柱膜通用全（quán）自動固相萃（cuì）取係統，並按照（zhào）圖1所（suǒ）示的方法進行Sepaths UP方法編輯並進行固相萃取富集，收集洗脫液。

對洗脫液進（jìn）行氮吹濃縮，當收集（jí）液濃縮到（dào）近幹時，加入流動相（xiàng）定容到1.0mL，待HPLC檢測。

圖1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法

1.3.3 HPLC分析（xī）

色譜柱：LabParts C18反相柱，5μm，4.6×250mm；

波長：238nm；

流速：1mL/min；

柱溫：35℃；

進樣量：20μL；

流動相：甲醇：磷（lín）酸鹽緩（huǎn）衝溶液（yè）= 65：35

2, 實驗（yàn）結果（guǒ） 

圖2，微囊藻毒素-LR標準工作液色（sè）譜圖（0.4ppm）

3，結果與討論 

本次實驗（yàn）展示使用Empore^TM 固相萃（cuì）取膜(C18，47mm，固相萃取柱，貨號：98-0604-0217-3)對自來水中微囊藻毒素-LR進行富集提取的方法。實驗中，樣品經固相萃取淨化、濃縮等前處理步（bù）驟（zhòu）後，經HPLC分析得到微囊藻毒素-LR的加標回收率達80.1%~86.4%，結果較好。四次重（chóng）複實驗RSD=3.1%，通道（dào）間（jiān）的平行性良好（hǎo）。實驗表（biǎo）明（míng），Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，貨號：98-0604-0217-3)適用於（yú）消微囊藻毒素-LR的萃取淨化（huà）。

4，參考文獻

[1] GB/T 5749-2006 生活飲用水衛生標準

[2]GB/T 20466-2006 水（shuǐ）中微囊藻毒素的測定（dìng）

圖 3 加標樣品色（sè）譜圖

表1 加標回收率結果