SPE固相萃取-液相色譜串聯質譜法測定動物（wù）源食品中的（de）氯黴素

SPE固相萃（cuì）取-液相色譜串聯質譜法測定動物源食品中的氯黴素

前言

氯黴素（sù）曾廣泛用（yòng）於治療各種敏感菌感染，後因對造血係統有（yǒu）嚴重不良反應，故對其臨床應用現已做出嚴格控製。氯黴素可（kě）用於傷寒、副傷寒和立克（kè）次（cì）體病等及敏感菌所致的嚴（yán）重（chóng）感（gǎn）染（rǎn）。氯黴素在腦脊液中濃度較高，也常用於治療（liáo）其他藥物療效較差的腦膜炎患者。由於氯黴素可引（yǐn）起嚴重的（de）毒副作用，所（suǒ）以建立一種高效、快速的定量流程及檢測方法尤（yóu）為重要。本文使用SPE1000全自動（dòng）固相萃取係統對牛肉中的（de）氯黴素進行固相萃取富集，用高效液相色譜（pǔ）質譜儀進（jìn）行檢（jiǎn）測。

本（běn）文參考“農業部781號公告-2-2006 動物（wù）源食（shí）品中氯黴素殘（cán）留量（liàng）的測定 液相色譜—串聯質譜法”采用SPE1000全自動（dòng）固相（xiàng）萃取係統，測定氯黴素的回收效果，實驗證（zhèng）明（míng），氯黴素回收率在90.2%~99.5%之間，重現性RSD為3.5%，回收率和重現性良好，說明SPE1000全自（zì）動固相萃取係統可靠、穩定（dìng），適（shì）用（yòng）於動物源食品中的氯黴素樣品前處理（lǐ）。

關鍵詞：氯（lǜ）黴素，SPE1000全自動（dòng）固相萃取係統，液相色譜串聯質（zhì）譜， 

1實驗過程

1.1儀器與（yǔ）試劑

SPE1000全自動（dòng）固相萃取係統（.17c嫩嫩草色视频蜜 %A公司）；

SCIEX 4500 液相色譜串聯質譜（SCIEX）；

氯（lǜ）黴素，100 mg/L，壇墨質檢；

氯黴素D5，100 mg/L，壇墨質檢；

氯（lǜ）化鈉（分析純）；

正己烷（色譜純）；

乙酸乙酯（色譜純（chún））；

乙腈（色譜純）；

C18固相萃取柱，（1000 mg/6 mL.17c嫩嫩草色视频蜜 %A）；

實驗用水：超純水。

1.2標準工（gōng）作液的配製（zhì）

取1 mL氯黴素標品於10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。

取100 μL 的氯（lǜ）黴素標準（zhǔn）儲備液，用甲醇定容到10 mL，配製（zhì）成0.1 μg/mL標準工作液。

取1 mL氯黴素D5標品於（yú）10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃（nóng）度為10 μg/mL的標準（zhǔn）儲（chǔ）備液。

取100 μL 的氯黴素D5標準儲備液，用甲醇定容到10 mL，配製成0.1 μg/mL標準工作液。

1.3試驗方法（fǎ）

1.3.1樣品（pǐn）準備（bèi）

取均質後的樣品5g置於50mL離心管中（zhōng），加入內標200μL，氯黴素標液200μL,加入（rù）乙腈5mL，4%氯化鈉5mL，渦旋2min，4000rad/min離心10min，取上清（qīng）液至另一個50mL離（lí）心管中，重複提取一次，合並提取液。提取液中加入正己烷（wán）5mL，渦旋2min，2000rad/min離心（xīn）10min，棄（qì）去上（shàng）層清液，重複一次，加入水飽和乙酸乙酯5mL，渦旋1min，2000rad/min離心10min，將上層液轉移到15mL離心管中，重複提取（qǔ）一次，合並提取液氮（dàn）吹至幹，用水：乙腈（95:5）5mL溶解，備用。

同（tóng）時做樣品空白，加入內標200μL，剩下同樣品處理 。

1.3.2 固相萃取及濃縮

按照圖1所示（shì）的方法進行SPE1000方法編輯，並加載方法到相應通道，進行（háng）樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至幹，用（yòng）1 mL流動相定容。

圖1   氯黴素的SPE富集方法

1.3.3 UPLC-MS測定牛肉中氯黴素

液相條件：

色譜柱：C18，5 μm，4.6 mm*100mm； 

流    速：0.2 mL/min ；

進樣量：5 μL；

流（liú）動相：乙腈：水=40:60;

MS條件（jiàn）：

氣簾氣~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  噴霧（wù）電壓-4500V

表1  氯黴素（sù）母離子/子離子(定（dìng）量例子152.0)

2試驗（yàn）結果

2.1牛（niú）肉中氯黴素色譜（pǔ）圖

2.1.1牛肉中氯黴素標品色譜圖

圖2為取200 μL的氯黴素標準工作液和200μL氯黴素內標工作液，用流動相（xiàng）定容到1.0 mL檢測，氯（lǜ）黴素（sù）標品（pǐn）出峰色譜圖，出峰時間為 1.50min。

圖2  氯黴素標品（pǐn）出峰色譜圖

2.1.2牛（niú）肉中氯黴素樣（yàng）品色譜圖

圖3氯黴（méi）素加標樣品出峰色譜圖（tú），出（chū）峰時間為1.50min，圖4為空白樣（yàng）品色譜圖。

圖3  氯黴素加標樣（yàng）品出峰色（sè）譜圖

圖4   空白樣品色譜圖

2.2 UPLC-MS測定牛肉（ròu）中氯黴素回（huí）收率

液質測定牛肉中氯黴素回收率（lǜ）計算結果如下（xià）表，萃取富集後的回收率（lǜ）在之間90.2%~99.5%，重現性RSD為3.5%。

表2  牛肉中氯黴素（sù）的加標回收率（加標量4 ug/kg）

3結（jié）果與討論

SPE1000全（quán）自動固相萃取係統淨化的（de）樣品，其回收率在90.2%~99.5%,重現性為3.5%，準確度與平行性良好且自動化效率（lǜ）高，可應用於（yú）此類（lèi）樣品的前處理方法中。

參考文獻

農業（yè）部781號公（gōng）告（gào）-2-2006 動（dòng）物源食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法